2019年5月31日-6月4日，第55屆ASCO年會繼續(xù)相聚芝加哥，今年會議主題是:

　　ASCO會議內容有許多關于液體活檢的研究進展，今天我們通過ASCO會議來看看循環(huán)腫瘤細胞CTCs在免疫治療和腫瘤免疫學中的相關報道。

 

1 PD-L1 expression on circulating tumor cells and prognosis of breast cancer patients.

【乳腺癌患者循環(huán)腫瘤細胞中的PD-L1表達和預后】

　　● 研究地區(qū)：中國·北京協(xié)和醫(yī)學院

　　● 摘要鏈接：http://abstracts.asco.org/239/AbstView_239_247627.html

研究背景：目前臨床上部分患者能夠從PD1/PD-L1抑制劑治療中受益，也有有針對特定乳腺癌患者的臨床試驗。雖然我們知道乳腺癌的預后與CTCs有關且對分子靶向治療的預測和監(jiān)督至關重要，但PD-L1在CTCs中的表達尚缺乏研究, 且對PD-L1檢測點抑制劑的預測生物標志物反應缺乏。因此，本研究試圖探討乳腺癌患者CTCs中PD-L1的表達與預后及臨床病理特征的關系。

研究方法：通過基因探針雜交，分析20例原發(fā)性乳腺癌患者的CTCs和PD-L1基因在CTCs上的表達。采用卡方檢驗分析臨床病理特征與CTCs中PD-L1表達的關系。采用Kaplan-Meier和單變量Cox比例風險模型分析比較高pd-l1表達和低pd-l1表達患者的生存率。

研究結果：

　　(1)在20名患者中，15名患者在其7.5ml外周血中檢測到有超過1個CTC，在這15名患者中，每名患者至少有1個CTC顯示PD-L1;

　　(2)將PD-L1在CTC上的表達分為低表達、中表達和高表達，然后給出低表達1分，中等表達2分和高表達3分，PD-L1高表達總分≥3，而PD-L1低表達總分<3;我們發(fā)現(xiàn)CTC上的PD-L1表達與腫瘤大小 (P=0.012) 淋巴結狀態(tài)(P=0.001) 和PR狀態(tài) (P=0.037) 有關，大腫瘤組T2和T3之間存在顯著差異(P=0.003) ;而在淋巴結狀態(tài)組中N1 vs N3 (P=0.000) 中N2 vs N3 (P=0.015) 之間存在統(tǒng)計學差異;

　　(3)研究數(shù)據(jù)表明，與CTC上的低PD-L1表達相比，CTC上具有高PD-L1表達的患者總體存活率較差 (P=0.004) (表) ; 單變量Cox比例風險模型分析顯示, CTC上高PD-L1表達是一個獨立的預后因素。

結論：CTC上的PD-L1確實與一些不良的臨床病理特征相關;CTC上PD-L1的高表達是較短存活的獨立預后因素，與較短的生存期相關。

 

2 Role of the expression of PD-L1 and CD47 on circulating tumor cells (CTCs) in the prediction of outcome in metastatic breast cancer (mBC) patients.

【循環(huán)腫瘤細胞 (CTCs) 上PD-L1和CD47表達在轉移性乳腺癌 (mBC) 患者預后中的作用】

研究地區(qū)：希臘

摘要鏈接：http://abstracts.asco.org/239/AbsView_239_267255.html

研究背景：CTCs中中先天性免疫檢查點 (CD47) 和適應性免疫檢查點 (PD-L1) 的檢測有可能協(xié)助對監(jiān)測免疫逃逸。在該研究中，評估了轉移性乳腺(MBC)患者CTCs中CD47和/或PD-L1表達與臨床特征之間的相關性。

研究方法：對98例MBC患者在一線治療開始前進行血液采集。進行外周血單核細胞 (PBMC) 細胞角蛋白 (CK) 、CD47和PD-L1的三重免疫熒光染色在，并使用Ariol顯微鏡系統(tǒng)分析每個患者1*106 PBMCs。用MDA.MB.231 乳腺癌細胞作為對照，對CK+CTCs的CD47和PD-L1表達水平進行標化。

研究結果：

　　(1)22.4%(22/98)的患者檢測到CK+CTCs;分別在41.9%和11.6%的CTCs中鑒定出高CD47和PD-L1表達，而在9.1%的CTC中，兩種標志物均觀察到高表達;

　　(2)在11.2%的患者中鑒定出具有至少一種標志物高表達(CD47-高和/或PD-L1-高)的CTC，盡管在三陰性、激素受體陽性和HER2陽性的原發(fā)性腫瘤患者中具有差異分布 (分別為27.3%、12.5% 、0%, p=0.040);CD47-高和/或PD-L1-高的CTCs與疾病進展相關(27.8% vs 5.6%，p=0.005)，與較短的PFS相關【中位數(shù)5.8(4.1~7.5)vs 13.3(11.4~15.2)個月， p=0.010】，而僅檢測到PD-L1-高的CTCs與OS降低相關【中位數(shù)23.8(5.8~41.8)vs 35.7(29.9~41.4)個月，p=0.043】;

　　(3)多變量Cox回歸分析顯示CD47-高和/或PD-L1-高CTCs預測復發(fā)風險增加【HR：2.7(95%CI：1.3~5.7); p=0.009】，而PD-L1-高CTCs與高死亡風險相關【HR：4.8(95%CI：1.4~16.6); p=0.011】。

結論：免疫檢查點CD47和PD-L1在mBC患者的CTC子集中共表達;在CTC上檢測到高CD47和/或PD-L1表達與三陰性腫瘤、疾病進展和患者不良結果相關，并且可用于改善mBC中的預后;攜帶該類CTC群體的患者可受益于抗CD47和抗PD-L1免疫治療。

 

3 Circulating tumor cell (CTC) PD-L1 and interferon regulatory factor-1 (IRF-1) expression as biomarkers of anti-PD-(L)1 response.

【循環(huán)腫瘤細胞 (CTC) PD-L1和干擾素調節(jié)因子-1 (IRF-1) 表達作為抗PD- (L) 1應答的生物標志物】

研究地區(qū)：美國

摘要鏈接：http://abstracts.asco.org/239/AbstView_239_269835.html

研究背景：抗PD-L1檢查點抑制劑(CPI)由于其持久的反應和耐受性顯著提高了多種實體瘤患者的生存率。不幸的是，只有一小部分實體瘤患者(PTs)有客觀反應。假設CTCs中的PD-L1和IRF-1表達可能與CPI反應相關，并對它們的表達進行初步評估。

研究方法：對轉移性實體瘤患者行抗PD-L1單藥或聯(lián)合治療。在3個時間點抽取7.5 cc的血液進行CTC評估：基線、1次CPI劑量后、開始CPI后3-6個月或停止CPI時。外周血CTC用Accuyte試劑盒分離，并進行CK/EPCAM、抗CD45、核染色、PD-L1和IRF-1染色。然后用Cytefinder軟件識別CTC。

研究結果：

　　(1)已登記16例患者，患者中位年齡71歲(28~83)、中位ECOG = 1(0~3);50%是女性;其中50%為NSCLC，13%為頭頸癌，13%為乳腺癌，24%為其他癌種;

　　(2)在基線時期，有13位患者血液中鑒定到了CTC(#CTCs范圍在0~101)，其中12位患者自開始CPI治療時接受影像學掃描，根據(jù)RECIST 1.1( 實體腫瘤的療效評價標準 1.1 版 )，其中3位患者有部分反應(PR)，1位患者有穩(wěn)定疾病(SD)，8位患有疾病進展(PD);具有PR的患者在基線時期的CTC上IRF-1染色更常見(表)，并且1/3的CTC PD-L1陽性;

　　(3)6例具有腫瘤組織PD-L1染色的結果可用于相關性分析，其中3例為PD-L1+(陽性定義為腫瘤組織PD-L1≥1%);腫瘤組織PD-L1+的1位患者具有PD-L1+的CTCs;在腫瘤組織PD-L1-的3位患者中，1位患者具有混合的PD-L1+/PD-L1-CTC群，而另2位CTC沒有檢測到PD-L1染色。

結論：CTC的分離和計數(shù)在不同實體腫瘤中都是可行的。抗PD-L1的PR患者可能具有較高的IRF-1+CTCs;不過該結果僅為初步，更多的pts和樣本正在評估中。

 

4 Quantification of activated and exhausted immune cell populations and simultaneous characterization of CTCs in peripheral blood of cancer patients receiving checkpoint inhibitor therapy

【接受檢查點抑制劑治療的癌癥患者外周血中活化和耗竭免疫細胞群的定量以及CTCs的表征】

研究地區(qū)：美國

摘要鏈接：http://abstracts.asco.org/239/AbstiView_239_269185.html

研究背景：免疫檢查點抑制劑(ICIs)正成為許多腫瘤的標準治療方案，但是有相當一部分患者對ICIs此反應不佳。單個生物標志物如PD-L1在預測患者獲益方面不夠準確。該研究試圖擴展Epic Sciences無創(chuàng)液體活檢平臺，利用CTC分子分析和免疫細胞變化來識別ICIs的預測性外周血生物標志物。

研究方法：從接受ICIs治療的前列腺癌、腎癌和膀胱癌患者中采集基線和治療時的血液樣本，并發(fā)送給EPIC科學。將核細胞鋪在玻璃載玻片上，對CTCs進行免疫板染色(pan-ck，CD45，pd-l1和dapi)，其中活化的細胞(cd4，cd8，ki-67和dapi)，衰竭的免疫細胞(cd8，ki-67，pd-1，lag-3，tim-3和dapi)。免疫細胞和循環(huán)腫瘤細胞群的變化用高通量數(shù)字病理學進行評估。

研究結果：73%(24/33)患者中檢出CTC，其中12%(4/33)患者中檢出PD-L1+CTC。9個受試治療樣本中未檢測到PD-L1+CTC。在14例匹配樣本的患者的基線相比，在治療樣本中57%(8/14)患者的活化CD4+白細胞增加，36%(5/14)患者的活化CD8+白細胞的增加。在匹配樣本的一個子集(14個樣本中的6個)上進行耗盡分析。在基線和治療樣本中，一名患者的CD8+白細胞消耗量高于健康供體對照組，兩名患者的CD8+白細胞消耗量低于對照組。從基線到治療期間，未觀察到耗盡的CD8+白細胞的變化。

結論：開發(fā)了一個基于液體活檢的平臺，可以同時測量單個外周血樣本中CTC和白細胞的生物標志物。檢測ICIs治療后激活和耗盡的免疫細胞群的變化，并評估CTC上PD-L1的表達,下一步的工作是將免疫細胞和罕見細胞群分層。

5 Clinical implication of monitoring PD-L1+ circulating tumor cells (CTCs) in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) receiving immunotherapy.

【在接受免疫治療的非小細胞肺癌(NSCLC)患者中監(jiān)測PD-L1+循環(huán)腫瘤細胞(CTC)的臨床意義】

研究地區(qū)：美國

摘要鏈接：http://abstracts.asco.org/239/AbstView_239_269637.html

研究背景：CTC是液體活檢的細胞組成部分，對這些細胞的檢測有助于鑒別殘留疾病和預后不良的患者。然而，對于不同類型的CTC是否可以用來監(jiān)測癌癥干性(Stemness)和患者的免疫治療反應尚不清楚。目前，用于監(jiān)測CTC中癌干細胞標記物(如CD44或CD166)和免疫治療靶點(包括PD-L1)的臨床數(shù)據(jù)有限。本研究假設動態(tài)監(jiān)測這些標記物的CTC陽性與NSCLC患者對免疫檢查點抑制劑治療的反應相關。

研究方法：作為外周血細胞前瞻性分析的一部分，納入了30例接受免疫治療(彭布羅珠單抗或阿托唑單抗)或聯(lián)合化療的NSCLC患者，每隔3-4周采集血樣，最多24周。分離并分析外周血單個核細胞的CD45，鑒定非白細胞CTC的CD166和CD4，鑒定潛在CTC中的PD-L1和癌癥干細胞標記物。根據(jù)Recist標準評估患者的反應。采用單因素方差分析對每個時間點的樣本進行統(tǒng)計分析。

研究結果：

　　(1)在第二個時間點檢測到的PD-L1+CD45-CTC減少與治療初始反應最強相關;相反，與疾病穩(wěn)定(SD)或部分緩解(PR)的患者相比，在疾病進展的患者中發(fā)現(xiàn)PD-L1+CD45-細胞數(shù)量增加(p = 0.01);

　　(2)CD45-細胞、CD44+CD45-細胞、CD166+CD45-細胞顯示出與臨床結果無顯著相關性;

　　(3)CTC上的基線PD-L1水平與組織上的PD-L1水平無關。

結論：報告了免疫治療開始前后監(jiān)測血中CTC表面標志物的可行性和潛在的臨床意義, 發(fā)現(xiàn)免疫治療無應答者中PD-L1+CTCs的增加值需進一步驗證。

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